我现在要做个课题,证明ras基因突变在肿瘤代谢中的作用,考虑用ras基因突变的质粒进行转染肿瘤细胞株。但存在一个问题,购买的肿瘤细胞株会不会就带有ras基因突变呢?有没有肯定没有ras基因突变的肿瘤细胞株卖?或更好的设计方案?
提RNA,反转录cDNA,设计ras基因引物,PCR,得到符合ras基因大小的条带后,切胶回收连接转化,提质粒送测序。比对结果看是否存在突变。
推荐你找几本基础的书读一下,这些细节问题一点一点在社区上问不是办法,等你学会了就该写毕业论文了。或者找你师兄师姐带你一下更快捷方便,但是基础还是要牢固啊……否则举一不能反三,做实验的时候很吃亏啊
如果单纯是学习引物设计你看一下primer5这个软件的使用教程就可以了,但是要了解原理什么得看看分子生物学了。
如果时间真的很急,就找公司给你搞定一切吧,从开始设计到质粒构建成功……哈哈,老板有钱让你这么干就行