我因课题需要要作干扰和点突变,要涉及到5株转染细胞株,看现在文献用慢病毒转染的比较多,反而直接用质粒转染的比较少,所以想问一下这两者有没有本质上得区别。我时间和经费有限,可能会偏向质粒转染,对以后发文章有没有什么影响。
慢病毒包装转染,应该是整合到基因组的。稳定表达。 而质粒,培养几代后,可能就丢失了。并且有时候会发生耐受。 这个就是本质区别。质粒毕竟是外来物。放在细菌里还好,放在细胞里,不稳定的。
慢病毒有点一劳永逸,质粒的话 效果维持时间短 需要评价转染效率
其实本质上区别不大,转染质粒照样会整合到染色体上,筛选出的stable cell就是质粒整合到染色体上的细胞。病毒分为逆转录病毒和腺病毒,前者会整合到染色体上,后者不会。病毒感染和质粒转染其实都是细胞转化的方法之一,只是前者效率很高,即使是普通转染效率很低的细胞,其感染效率也能达到90%以上;后者效率相对较低,只适合转染一些比较好转染的细胞。当然,前者更麻烦一些。
时间方面:质粒快,快很多, 本人当年做的是6个点突变,做慢病毒做得要吐了,后来用质粒转染很快,很快就出结果了,只是质粒转染存在一个转染效率的评价问题,就是结果分析的时候,你怎么证明这些突变和野生型的转染效率是相当的。这个建议用荧光蛋白吧