1.可能抗体原因，有的时候抗体重复用了多次就会这样，肠道组织尤其如此，我做过一次，也发现同样的问题，不过幸好那条杂带离得比较远，可以建议你电泳时间长一点。把两条带跑开。选择正确位置的那条。

2.可能你压片的时候胶片移动，不过这可能性不大。总之，你可以换支抗体做做看，也可以选择正确的条带，没什么大的影响。不像操作问题。

 1、 将大鼠的肠样本重新提取一下。会不会当初做裂解液前没有洗干净，导致肠中的一些食物有残留，而其中正好有其他物种的样本。β－ACTIN在物种之间的保守性是比较高的，所以，你的抗体完全有可能能同时识别这两个物种的β－actin；另外不同物种的β－ACTIN在分子量上是略微有所差异的，所以导致了你这样的结果。
2、换一管抗体。可能是抗体的特异性比较差，对肠组织中的其他蛋白有交叉，分子量又比较接近。

其实你的第二张图的第二、三泳道上的样本均只有一条带。可见你的样品中大鼠肠组织中也有只跑出一条带的。样本处理时要注意低温、迅速。我们一般都在冰上取材、裂解、上样。不反复冻融。

可能蛋白提取过程中有降解，肠道组织蛋白降解比较厉害，取肠子后要灌注冲洗一下。还有就是注意冰上操作的规范就行，研磨好后裂解30min。sigma的抗体很好的。

部分蛋白被降解的可能性较大。

最有可能是一抗浓度稍有点高，但不排除二抗浓度高的原因。可以将一抗、二抗的稀释比再稍降低点试试，应该没有问题

有些蛋白就是条带不止一条，我做cdc28也有多条，可能是磷酸化吧

换一个品牌的抗体试试吧，我们遇到过，跑组织样品就是两条，买了一个别的牌子贵点的抗体，就好了