做western blot前必须要建立在有关基因的PCR的结果上吗？

请问在做western blot前必须要建立在有关基因的PCR的结果上吗？想做Akt, P70s6k等几个磷酸化蛋白，但是好像没有磷酸化的引物啊。

信号转导

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我觉得没有必要，如果要检测蛋白的变化还是以wb为主，pcr为辅，毕竟wb反应的结果是实实在在的蛋白的含量，而PCR只是反应mRNA的量，

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2024-11-12 05:06:43

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我觉得还是有必要的，比较抗体还是比较贵的，PCR相对便宜很多。在不确定实验结果的基础上，有些boss不一定会同意买抗体的来做western-blot的。
不过前面说的也对，PCR结果与WB的结果不一定完全匹配的，比较一个是基因水平，一个是蛋白水平。不过楼主要检测磷酸化的话，就和PCR没有什么关系了。因为PCR只能通过转录水平的变化来间接推测蛋白翻译水平的变化，而对翻译后的修饰（磷酸化）是没有指导作用的。所以楼主是找不到磷酸化的引物的，因为磷酸化不是基因水平带来的，是蛋白质后期修饰带来的。如果要做PCR，普通的引物就可以了。

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2024-11-12 05:10:50