实验最近遇到一个很大的问题,我一共做了四个细胞系,两个正常,两个肿瘤,铺板后饥饿细胞后加刺激,但是我发现我饥饿6、12、24、48小时后,对照里仍旧有p-ERK,P-AKT的表达,而且应该与抗体无关,同实验的人做用同样的抗体就没有问题,很奇怪是怎么回事?
饥饿状态下可以杂出p-ERK,但是跟刺激后的p-ERK比,弱很多~~如果你想看不到,可以曝光弱点,或者二抗少加点。但如果你比刺激后的还强,那就只能说明你样品搞混了。
无论是ERK还是AKT在细胞里是低转录水平复制的,所以肯定本底会有
这个很正常的。但肯定比正常的细胞要低一些。可以加带血清的培液看是否能上升。有上升那就没问题,继续往下作好了