一般不会抑制总蛋白表达的楼主。希望楼主再做一遍。再说，药作用的话，你可以加个激动剂比如生长因子，比较下看 可以这样 con con+激动剂 con+药 con+激动剂+药

总ERK高了 磷酸化ERK肯定也高了，可以拿磷酸化ERK灰度值除以总ERK
然后比较 ，如果没有变化 A药就是跟磷酸化ERK没关系了，A药要么促进ERK转录 要么抑制ERK降解，如果磷酸化有变化，加药顺序你要好好斟酌，最好是分几组：；1.对照未处理组；2.只加A药；3.只加抑制剂；4.同时加A药和抑制剂 ；5.先加A药 再加抑制剂（两个复孔，一个加A药后收蛋白 一个加完抑制剂再收蛋白）；6.先加抑制剂 再加A药；当然很多文章也不加这么多组的，当然抑制剂协同也并不能完全证明的，看看是否对磷酸化ERK的蛋白有没有影响 或者对去磷酸化ERK蛋白有没有影响
。总之 你要证明起来还是挺费力的，当然 你能发现促进磷酸化也就可以了，很多文章都是这样 中间的机制是个黑匣子