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2024-11-25 21:49:38

质粒DNA抽提完后（用除内毒素试剂盒），是否需要除菌？

准备做转染细胞，用的试剂是invitrogen的lipofectamine 2000。有几个问题想请教一下各位高手。谢谢！
1。质粒DNA抽提完后（用除内毒素试剂盒），是否需要除菌。如果需要，一般用什么方法？

2.如果是做瞬时转染，是不是可以不用线性化质粒，而是提完质粒就可以直接用于转染。如果是稳定转染，就要先酶切质粒，使其线性化，然后再转染。

3.invitrogen的lipofectamine 2000操作说明上说，质粒和脂质体要先用Opti-MEM分别稀释配成溶液后，再混合，然后再加入准备转染的细胞孔中，我就想问此时细胞孔中的培养液是用什么培养液，是不是可以也用Opti-MEM或者无血清无抗性培养基（其它材料上看到）或细胞生长时的培养基含5-10%血清。不知各位都是用什么，可否告知配方（供我参考一下）。

细胞生物学分子生物学

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2个回答

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1.一般大抽kit都可以除菌你要不放心乙醚熏一下；2.不需要线性化稳转也不需要 ps：瞬转的话筛稳转比较麻烦；3.用你养细胞的培养基无血清

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2024-11-26 00:19:44

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1, 质粒抽提好之后可以直接转染，没有问题；2，质粒不需要线性化；3，293T是最好转染的细胞，虽然会脱壁，但是成果率仍很高

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2024-11-26 01:30:23

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