2024-09-04 04:02:35
NF-KB p65存在不存在磷酸化?如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体?做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用,想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题: 1、NF-KB p65存在不存在磷酸化?如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体? 2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体,也有文献采用的是磷酸化的抗体,所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核,所以测核内普通的NF-KB p65活性与测总的NF-KB p65活性意义是一样的,我想知道是不是这样? 3、对于NF-KB p65活性测定,用p-p65抗体时,组织蛋白提取能不能用全蛋白提取试剂盒?还是必须用包浆蛋白或者核蛋白提取试剂盒? 4、对于NF-KB p65活性测定时,内参应该选用actin还是GAPDH?如果用GAPDH做内参影响大吗? |
1、NF-KB p65存在不存在磷酸化?如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体?磷酸化后才有活性,然后和p50解离,进入细胞核内,启动下游转录。 2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体,也有文献采用的是磷酸化的抗体,所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核,所以测核内普通的NF-KB p65活性与测总的NF-KB p65活性意义是一样的,我想知道是不是这样?不是,测量激活更有意义。 3、对于NF-KB p65活性测定,用p-p65抗体时,组织蛋白提取能不能用全蛋白提取试剂盒?还是必须用包浆蛋白或者核蛋白提取试剂盒?一般测量核内的,所以采用核蛋白提取试剂盒 4、对于NF-KB p65活性测定时,内参应该选用actin还是GAPDH?如果用GAPDH做内参影响大吗?应该都可以,用actin的较多 |
提问时间: | 2024-09-04 |
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