NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？

做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：

1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？

2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF-KB p65活性与测总的NF-KB p65活性意义是一样的，我想知道是不是这样？

3、对于NF-KB p65活性测定，用p-p65抗体时，组织蛋白提取能不能用全蛋白提取试剂盒？还是必须用包浆蛋白或者核蛋白提取试剂盒？

4、对于NF-KB p65活性测定时，内参应该选用actin还是GAPDH？如果用GAPDH做内参影响大吗？
期盼答复，谢谢！

免疫学生物信息学分子生物学

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如果提取核蛋白的话，内参要换成能识别核蛋白的吧

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2024-09-04 07:08:23

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我是直接用的P65抗体，提取的细胞总蛋白做的，内参用的actin

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2024-09-04 07:40:43

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1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？磷酸化后才有活性，然后和p50解离，进入细胞核内，启动下游转录。

2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF-KB p65活性与测总的NF-KB p65活性意义是一样的，我想知道是不是这样？不是，测量激活更有意义。

3、对于NF-KB p65活性测定，用p-p65抗体时，组织蛋白提取能不能用全蛋白提取试剂盒？还是必须用包浆蛋白或者核蛋白提取试剂盒？一般测量核内的，所以采用核蛋白提取试剂盒

4、对于NF-KB p65活性测定时，内参应该选用actin还是GAPDH？如果用GAPDH做内参影响大吗？应该都可以，用actin的较多

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2024-09-04 08:39:22

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