up vote 237 down vote

2024-09-05 09:27:00

免疫荧光染色一抗和二抗的要求？

我想做某个酶的免疫荧光染色。想求教高手：一抗和二抗有什么要求。买那个公司的比较好？

细胞生物学免疫学

回答 0 评论

更多

3个回答

up vote 18 down vote

免疫荧光标记的一抗的要求主要有：. 一抗最好是单抗，选取得抗体能够识别非变性位点，因此有些Western和免疫组化的抗体不一定适合于immunofluorescence。建议使用多聚甲醛的固定方法。
2. 二抗一般没有特殊的要求，但是最好使用荧光强度比较强的标记物，比如Oregon Green 488, Alexa Fluo, Cy3等。（molecular probe的二抗不错的）。
3. 考虑到双色荧光标的需要，二抗一般要求交叉吸附过的二抗，即抗兔二抗需要不和人、小鼠、羊等IgG反应。4. 考虑到双色荧光标的需要，两个一抗最好来源不同，这样可以免去分先后标记得麻烦。可以继续讨论哦。

0 评论收藏举报

2024-09-05 12:41:11

up vote 13 down vote

你可以找参考文献，要是没有可以试试ICC的,其实主要取决于检测的目的分子，如果空间折叠不是很复杂，可以试试WB和IHC抗体的。

0 评论收藏举报

2024-09-05 13:06:57

up vote 17 down vote

楼上的已经说的很清楚了，再补充几点，供参考。
1. 一抗抚育最好4℃过夜；2.二抗的抚育时间要掌握好，不易过短，也不能太长，我一般是在37℃1.5小时左右，效果挺好的；3.每次PBS清洗的时候，一定要洗彻底。

0 评论收藏举报

2024-09-05 14:32:10

你的回答

提问时间：	2024-09-05
浏览量：	4262
最近回答：	2024-09-05

相关问题

在甲醇中加入片碱会生成醇钠吗？我觉得这样不是在浪费... 回答 5

二甲基亚砜怎么除去？回答 4

我的反应必须是无水无氧，但是通氮后无水乙醚更容易挥... 回答 5

要旋转蒸发干水或者甲醇这样的溶剂该怎么办呢？回答 9

在水中溶解度很低，如何提高药物的溶解度？回答 4

多糖的纯化应该用哪种柱层析？回答 5

血清灭活的方法金属浴可以嘛回答 4

用什么方法将培养基进行处理，使其达到无菌状态？回答 6

生物药（抗体、ADC、疫苗、重组蛋白、修饰类重组蛋... 回答 2

大家在做旋转蒸发的时候有没有遇到过这个问题？回答 6