4个回答
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扩不出来太正常了。可能你的模板根本就没有，或者降解，或者表达很低。另一方面，这么长，聚合酶可能在中途就掉下来了。建议你分段扩增。比如分成5－10个PCR，每段扩600－800bp，设计一些overlap的区域。最好这些区域中含有唯一的酶切位点，然后通过连接酶把基因连起来。如果按这种方法，我怀疑在3末端能顺利扩出，可能5末端的就扩不出来了。 |
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不知道您的模板是什么？建议您根据数据库选择表达量高的部位进行模板制备，这样的话，也比较容易扩增出来；其次，7000bp不好扩增，其实没有必要分成很多段，两三段就可以了，选择合适的酶切位点；再次，选择高保真的聚合酶，这样扩增出来不容易出现突变，可以适当提高循环数，增大产量，可以设置梯度PCR，寻找最优的条件。 |
