最近新的任务是构建一个AUH的表达载体。并且要在表达蛋白的C末端添加一个HA标签，因为是第一次接触构建表达载体，所以有以下几个疑问。
表达的蛋白前添加标签是否有两种方法？一，是在设计引物的时候，在前面加上HA标签蛋白的序列。二，是表达载体本身带有HA标签蛋白，所需要做的就是把外源序列插进去。
如果是用第一种方法，那么请问，这个HA标签的序列应该放在什么位置，如何放置，是放在引物序列的后面吗？并且如何放置才能使HA标签位于表达蛋白的C末端。
在引物的话，标签位置选择起始密码子后，或者终止密码子前，要注意读码正确。
表达蛋白的C末端添加一个HA标签，利用引物去加，只能放在下游引物上，最终HA应位于编码链上终止密码子和其前一个密码子之间。下游引物是与编码链反向互补的序列。
首先默认载体上有启动子
1.载体上没有HA，加在N端要考虑起始密码子和移码突变，加在C端要考虑移码突变和终止密码子
2.载体上有HA，选择合适的酶切位点，避免移码突变
