你做的瞬时转染吧? 1、瞬时转染当然是转染后2-3天左右蛋白表达量最高,之后就会下降。如果你要一直稳定表达就需要做稳转株系了,推荐定点整合,随机的话,可能会传几代后,基因还是会丢掉,导致表达量下降。 2、瞬转需要提高表达量的话,需要每次实验前,重新提质粒,然后做瞬转。瞬转的效率直接影响表达量的效率,目前主流的做法就是电转和脂质体转染。各有优缺点吧,不过293的转化应该是细胞当中比较容易转的。 3、如果长期需要做目的基因研究,推荐做稳转株系。这样研究上下游通路时,不管是做基因检测,蛋白检测或者高通量测序,都方便的很。
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