2024-12-20 21:12:47

质粒转染后蛋白表达量低,怎样提高?

我的一个载体为pcDNA3.1的质粒,一开始转染293T后蛋白表达量还挺高的,可是最近表达量表达量就变得很低。有什么方法能提高蛋白表达量吗?如果我将其重新转化之后,挑新的克隆提质粒,是否可能提高蛋白表达量?

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1个回答

你做的瞬时转染吧?
1、瞬时转染当然是转染后2-3天左右蛋白表达量最高,之后就会下降。如果你要一直稳定表达就需要做稳转株系了,推荐定点整合,随机的话,可能会传几代后,基因还是会丢掉,导致表达量下降。
2、瞬转需要提高表达量的话,需要每次实验前,重新提质粒,然后做瞬转。瞬转的效率直接影响表达量的效率,目前主流的做法就是电转和脂质体转染。各有优缺点吧,不过293的转化应该是细胞当中比较容易转的。
3、如果长期需要做目的基因研究,推荐做稳转株系。这样研究上下游通路时,不管是做基因检测,蛋白检测或者高通量测序,都方便的很。    

2024-12-20 21:36:35

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