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2024-09-20 11:42:44

用PT67作为包装细胞包病毒是不是也要同时转三个质粒进去？

我的实验需要自己包慢病毒。慢病毒质粒是在sigma上买的。质粒骨架是：SHC001 MISSION? pLKO.1-puro Control Vector，

我们实验室有PT67细胞（CRL-12284）了。据我所知，要包慢病毒最常用的是293T细胞。需要同时转三种质粒到293T细胞里去才能产慢病毒。我现在想问的是，293T和PT67细胞有什么区别？用PT67作为包装细胞包病毒是不是也要同时转三个质粒进去？还是只用把shRNA转染进PT67细胞就可以收集上清了啊？

谢谢！期待各位高手的宝贵意见！！！

分子生物学

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4个回答

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PT67应该是用来包装逆转录病毒的，这个细胞里面已经含有病毒包装所需的gag，pol还有env等元件，但是不知道慢病毒包含所需的gag，pol还有env是否与逆转录病毒一样？如果一样的话那就可以直接把慢病毒质粒转染进PT67就可以收集上清了。我觉得你可以试一试，因为慢病毒也属于逆转录病毒的一种啊。

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2024-09-20 11:49:04

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sigma的干扰应该是plko咯，用普通慢病毒包装质粒效果都很好的

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2024-09-20 12:24:04

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逆转录不病毒载体往往提供了其构成的主要元件，包装信号在LTR区域附近，根据LTR的来源可以判定该载体是基于哪种逆转录病毒而构建的。

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2024-09-20 12:49:33

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pLKO.1-puro 载体上面是用的HIV-1的包装信号，PT67是基于鼠逆转录病毒的结构基因表达细胞系。二者放在一起产生的病毒粒子对pLKO.1-puro 表达的病毒基因组包装效率很差。不建议使用此策略。

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2024-09-20 12:50:44

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