我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml

我们实验室用的电转液配方：Tris 20mM 2.4g，glycine(甘氨酸) 150mM 11.5g，甲醇（分析纯）20% 200ml，dd H2O 800ml加至1000ml，电转条件：200mA　2小时。电转液4℃保存，可以重复利用3-4次,每次用前补充点甲醇，每1000ml补充10ml甲醇吧。一直这么做，电转很稳定。

首先可以肯定的是40kd，300mA转45min是一定能转上的！转膜液也是没有问题的！条带很淡是否是你本身的样品浓度很稀？Mark转不上是否Mark本身有问题！转膜液我们都是这样配，一直没问题的！还有丽春红染色是与你丽春红的浓度和时间有关！

转膜缓冲液有问题，配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果很好，你可以试试。希望对您有帮助！