展开剂不是说非要几种溶剂，只要你的物质分的足够好就是了。

建议去上凝胶，或是用硅胶只有有50mg你保证是2个点，小极性的东西在硅胶上还是损失的不会太多的，自己摸一下条件，你这是细分不要拘泥于几个柱体积，要尽量的拿到尽可能多的单体化合物的量，所以根据你上面说的情况，石油醚乙酸乙酯系统还是不错的，你先将A的Rf值调到0.2左右，一直用这个极性洗脱，检测，如果检测到A很很少的时候就换比例，此比例就是B的Rf值0.2左右，这样的话理论上可以保证呢个你拿到最大的A,B的量，不要急，慢的话可以加压，但是极性梯度要慢慢来啊 ，好运！

如果想拿到A和B，我觉得你选展开剂应该以B为准选展开剂，选B的Rf在0.1-0.3之间的展开剂，至于柱体积我的理解是洗脱剂从加入到刚好从下端流出所加入的洗脱剂的体积，我一般都是大概估计，根据柱填料的体积估计。

2cm的柱子太小，要大柱子，5cm 的试试，建议5% 乙酸乙酯in石油醚,洗出A and B, 再加极性。

可以尝试逆流色谱分离，分成分A和B应当很简单，用石油醚（或正己烷）/乙酸乙酯/甲醇/水系统应该能得到很有效分离，还保证回收率。

你的东西极性比较小，而且Rf 0.4和0.5差的有点小，薄层板的硅胶比柱层析硅胶细，你这两个东西比较不易分开。可以考虑：1.用薄层层析硅胶装根柱子，耐心点洗脱；2. 薄层板展开，刮板；3. 上凝胶柱试一下。这几种方法都要细心一些。

1、柱子太短了，至少30cm。

2、如果样品少，吸附又严重，不要用粗的柱子，细一点的来分。

3、薄层层析的硅胶最好活化一下，放烤箱里面烘干了再装柱。最好有个泵加压，否则太慢。

4、Rf值相差不大，最好选好条件差在0.2以上。加大石油醚的比例。

5、分成多个管来接收，点板看哪些有你要的东西，然后合并。

6、用Sephadex LH-20跑一下，柱子要装高点，多调节一下比例试试，LH-20上没啥吸附。一次不成功再上一次就是。