2025-01-20 11:06:09
RNA-seq分析得出来的差异基因太少怎么办?测了给药量刺激前后细胞的差异基因,设置差异阈值大于1.5的情况下筛选出来的基因只有50-60个,查文献看相关文章做出来的差异基因都有几百上千个,这样的数据是否发不了文章。最开始设置的给药量选择的是一个对细胞存活率没有影响的浓度,所以想到差异基因有可能比一般文献少,但是没有想到少太多,差异基因少的话GO分析和KEGG分析出来的结果也不好,每条通路富集到的基因只有几个?求问这个要怎么办呢? |
1、可以设置差异阈值大于1筛选差异基因; 2、别人的结果只是用于讨论分析你的结果,可类似也可不同; 3、可以分析不同药物浓度下,差异阈值大于1差异基因的异同,这样似乎可以分析哪些基因对该药物敏感程度啊;##这个可以考虑作为文章内容的重点部分 4、可以考虑第3部分的药物敏感程度基因以高亮标示在GO、KEGG分析中,重点分析这些基因参与的生物学进程及参与的信号通路; 5、综上,可以发一篇SCIE; |
这里主要看几个问题: 第一你的研究是否存在生物学重复,如果存在生物学重复,那么1.5倍差异比较少的原因首先要考虑生物学不佳,即药物处理不稳定引起的差异基因过少的问题,这个时候推荐你首先进行整体样本的PCA分析,查看一下样本的重复性,简单一点的可以采用Excel的=correl命令查看两组数据的相关性。以及组间的相关性,这里可能需要你剔除一些比较异常的异常样本后再进行分析, 第二你的这个药物处理是否能观察到明确表型,不管是物理的还是化学的还是生物学的,只要显著性的差异表型,那么就意味着这个实验是成功的。差异基因少也是可以接受,即使只有60-70也是有可能。部分下游基因的敲出后,也就100-200差异基因。另外药物处理的时间点也很考究,比如,极短时间会有部分基因优先超表达,远期这些基因会下降。看你的采样时间也决定了效果。 第三你的算法采用,以及显著性阈值选择,一般来说测序数据FC=1.5倍,FDR0.05,芯片数据FC=1.5倍,P-Value0.05都是可以接受的阈值。如果卡得偏小,也可能会有影响。当然,还建议采用正确的算法,差异筛选一般用DESeq,EBSeq(测序),和Limma(芯片),别用t-test了。 如果以上几点都没有问题,有表型,并且没有异常点,阈值也合适。那么需要纠正一个误区,差异基因个数不是多就是对的。不同的处理效果就该有不同的差异基因数量。几十到几千都是很常见的,都是可以发文章的。只是差异基因少的时候Pathway分析意义不大,需要你对于这些基因进行逐一研究,选择研究点,或者参考GO分析的结果。 |
提问时间: | 2025-01-20 |
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