2024-12-23 15:53:39

如何设计蛋白组学策略?

我最近设计了一个实验,大意是需要找到两种培养的细胞的表达差异蛋白以解释某种药物对这两种细胞的作用效果差异。现在需要用到蛋白质组学技术,分析差异蛋白。有几个问题需要问问各位大大,忘得到帮助,特在此感谢!

问题:

1.我的设计是找到差异蛋白,再通过动物实验验证,最后可能做一点临床回顾分析论证。这样设计是否完整,是否应该补充其他内容?

2.根据我的设计最好选用哪种分离技术?(2DE?2D-DIGE?iTRAQ?SILAC?。。。)

3.几种技术如果交给公司做的话,大概的价钱,或者有没有推荐的公司?


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蛋白质组学×

4个回答

如果是谈到蛋白质组学,定义在组学概念的话,建议你用itraq ,现在有AB的5600这款仪器,做细胞的话,盲筛到3000种左右的蛋白应该没什么问题,筛到的蛋白够多,就可以通过分析手段挑出差异蛋白,之后你可以动物实验进行验证也好,临床回顾分析论证也好。这个手段固然是不错的,但是费用估计会比较高,如果是8标itraq实验,普遍收费应该在7万-9万之间吧。2DE和2D-DIGE实验费用就很低了,但是你得不到多少蛋白信息,就不用谈蛋白质组学了吧

2024-12-23 16:11:51

找到差异蛋白:细胞培养,药物刺激后,蛋白组学分析寻找差异蛋白;大量信息学分析后筛选有潜力蛋白。再通过动物实验验证:楼主可否详细说说动物实验验证设计思路?个人觉得先回到细胞验证要实验操作性强一些。临床回顾分析论证:可以收集临床样本,进行免疫组化或者WB,如果有针对X蛋白的抗体,操作性较好。


2024-12-23 16:15:56

用itraq4标,两种细胞,分对照和药物刺激,共4个样品,一次实验完成。如果想更好一点,做一次生物学重复,用itraq8标。8标大概8w块钱。


2024-12-23 16:18:36

个人建议选iTRAQ比较合适,分辨率和定量准确性都不错,就是价格有点贵,如果你是多组样品的话(多时间点或多组处理)话选iTRAQ会比较好一些,如果单组样品,又要考虑费用的话,选2DE的银染也不错,


2024-12-23 16:20:15

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