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2024-12-22 14:59:14
采用软件进行蛋白消光系数的测定，一般是采用哪个值呢？采用软件进行蛋白消光系数的测定，结果会给出两个值，一般是采用哪个值呢？ Extinction coefficients:Extinction coefficients are in units of M-1 cm-1, at 280 nm measured in water.Ext. coefficient 234400Abs 0.1% (=1 g/l) 1.610, assuming all pairs of Cys residues form cystinesExt. coefficient 232400Abs 0.1% (=1 g/l) 1.596, assuming all Cys residues are reduced是不是与蛋白序列中有没有游离的半胱氨酸有关？ 求高手帮忙解答 |
3个回答
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用十分纯的蛋白质稀释成一定浓度梯度再测量280nm紫外吸收峰，以此计算出斜率（虽然得不到截距，因为每一个浓度的绝对值并不知道）就能得到实际的消光系数。 理论公式：吸光度A=消光系数ε×浓度c。 理论计算，以三种带生色基团的氨基酸对280吸收峰的贡献程度为加权值【消光系数Extinction coefficients≈（5500×色氨酸数目）+（1490×酪氨酸数目）+（125×半胱氨酸数目）】，同时考虑空间效应对生色与消色之影响（半胱氨酸配对与否会影响消色生色），即得“吸光”系数（Abs）【ε】理论值。 |
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凯氏定氮法可以作为蛋白质绝对定量的一个通用方法。然后对已经定量的蛋白进行吸光度测定，然后计算出消光系数。
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