5个回答
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我没有进行浓缩，直接收集上清液，（为了提高蛋白浓度，实验时，我尽量让培养液体积最小，同时细胞又能耐受，用的是serm-free media，如果想检测media中某种蛋白的话）1000rpm,10min，取上清，-80度保存，用的时候，等体积sample buffer变性，等体积上样，根据我的泳道最大负荷量，上了80ul,做的是一个分子量8KDa的chemokine，效果还可以。 |
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试试超滤浓缩离心管 根据目的蛋白分子量选择对应的截留分子量的大小 然后测一下浓度 合适浓度时就可以加上样缓冲液煮了 不过如果上清液的蛋白分子量太大或太小 做WB效果都不大好 |
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可以的。我做过一种分泌蛋白，收集的是培养细胞的上清。一样的加入sample buffer变性，后续步骤是一样的，但是，如果这个蛋白分泌量少的话，western blot有可能做不出来。可以减少培养基的用量，来尽量提高分泌蛋白的浓度。可以试试看。 |
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试试超滤浓缩离心管 根据目的蛋白分子量选择对应的截留分子量的大小 然后测一下浓度 合适浓度时就可以加上样缓冲液煮了 不过如果上清液的蛋白分子量太大或太小 做WB效果都不大好 |
