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2024-11-18 21:06:01

没有蛋白的磷酸化抗体，如何检测一个蛋白的磷酸化水平？

我准备检测RIP1蛋白的磷酸化水平，但是市面上没有磷酸化RIP1抗体，那么如何检测RIP1的磷酸化水平？我看文献上讲用的是IP的方法，但是沉淀后的免疫复合物如何去跑电泳呢？是分别用RIP1的抗体和磷酸丝氨酸的抗体做一抗吗？而且查了资料和文献，磷酸丝氨酸的分子量也没有？难道是先做RIP1的电泳，然后洗脱，然后在同一个蛋白大小的位置再去检测磷酸化？请高手明示！

蛋白质组学

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4个回答

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提供个方案供参考。用RIP1蛋白的抗体做IP（需要确定你的抗体适合做IP），免疫沉淀复合物加loading buffer煮样后，进行SDS-PAGE，Western用泛抗丝氨酸磷酸化抗体，检测RIP1蛋白对应分子量位置的条带情况。间接说明RIP1蛋白的磷酸化

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2024-11-18 21:29:51

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磷酸丝氨酸的抗体做一抗，只要是发生丝氨酸磷酸化的蛋白都能被检测到，不针对特异性的蛋白，而是针对丝氨酸发生磷酸化的序列

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2024-11-18 21:41:46

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用同位素吧，32P，这个比较靠谱。anti-ser没有好用的，现在好用的抗体只有针对酪氨酸磷酸化的。还可以打质谱。

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2024-11-18 21:45:12

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ub贴在RIP蛋白的赖氨酸残基上形成泛素化，western 检测可见分子量不等的ladder,所以你要剪的条带是RIP蛋白分子量以及其分子量以上的地方

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2024-11-18 21:47:57

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提问时间：	2024-11-18
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最近回答：	2024-11-18

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