做中蛋白的纯化，上样后填料结块、堵柱等问题

做中蛋白的纯化，由于上样液比较粘稠，而导致上样后填料结块、堵柱等问题，做小试的时候通过0.45ul的膜过滤后可以上样，但是过滤速度极慢，不适合放大。另外，该蛋白由大肠杆菌表达，然后由包涵体变性溶解，再没切得到的短肽。所以上样液中含有融合蛋白等大分子物质，导致上述问题。之前试过离子交换（source 30Q），不过滤可以直接上柱，但由于收率低，后面换用反相层析发现不过滤的话不能上样。想请问大虾们有没有什么方法可以降低上样液的粘度。感激不尽！

生物制药

回答 0 评论

up vote 11 down vote

可以考察一下目的蛋白的热稳定性，如果比较耐热，可以试试加温沉淀杂质。核酸，脂类的存在也会大大的影响样品粘度。

0 评论收藏举报

2024-12-21 06:28:10

up vote 10 down vote

不知你用的融合蛋白是什么？如果能用亲和层析的方法把融合蛋白去除，可一步获得切割后的目标多肽。

0 评论收藏举报

2024-12-21 07:22:01

up vote 18 down vote

直接上样对纯化压力太大了。所以应该考虑目的蛋白的状态和性质，从而考虑采取合适的纯化手段。最保险的是过滤，具体采用哪一种需要根据你的样品来选择。有膜包过滤，有切向流方式的过滤，还有压滤等。当然过滤有难度的话可以考虑助滤剂。其次，考虑分步分离：离心，盐析，有机溶剂沉淀等。再其次考虑一下设备公司。

0 评论收藏举报

2024-12-21 07:33:39

up vote 5 down vote

过柱前可以考虑深层过滤去除大分子物质，深层过滤膜包孔径不是单一数值而是一个范围，可以选择大孔径范围的试试，降低杂蛋白含量，提高上样液浊度。

0 评论收藏举报

2024-12-21 07:58:08

你的回答

提问时间：	2024-12-21
浏览量：	3956
最近回答：	2024-12-21

做中蛋白的纯化，上样后填料结块、堵柱等问题

4个回答

你的回答

相关问题