细胞用IL-1刺激后mRNA表达降低,蛋白表达没趋势,老师让加MG132。蛋白可能通过泛素化修饰。方法:细胞在IL-1刺激后1小时加MG132(10ug/ml),设置对照组,单加IL-1,单加MG132,只加DMSO。理论上说,加了MG132后,WB应该是什么表现呢?
如果有泛素化介导的降解 加MG132蛋白应该递增 mRNA不变或者下降(MG132对细胞的毒性)MG132时间不易过久 我一般2-6h 过久细胞会大批凋亡 MG132能刺激NF-KB途径的凋亡,你是什么蛋白呢,有报道泛素化降解不,不是每个蛋白都是泛素化来降解的,如果不是 加MG132 你的蛋白WB就可能是呈现递减的趋势
没有变化 可能是细胞往后死的多了,收蛋白的时候,细胞就少了,导致没有什么变化,蛋白浓度测了没
看下mRNA是否下调