我们的衍生试剂是这样配置的，称取0.1克OPA，用1ml乙腈溶解，再加225μlβ-巯基乙醇，用0.4mol/L的硼酸缓冲液定容至10ml。样品中氨基酸的总量约1mg/mL。安捷伦液相在线衍生，进样量，衍生液1微升，样品1微升。
现在的问题是：①目标峰的峰面积会一针比一针小，大概差5％至10％的左右。②进10至20针后，衍生试剂会明显浑浊。就算衍生试剂不稳定降解，那也应该是过量的啊？为啥峰面积会变小呢？
衍生化反应关键是在反应过程，反应必须完全，衍生化产物必须在特定时间内稳定。所以氨基酸分析比如waters公司的方法都是采用柱前衍生化然后色谱分离。建议考察下柱前反应如何。
任何在线（我说在线）衍生物的产生，反应是否完全，不是重点。重点在于试剂的稳定性。因为是在线，所以是自动取样进行衍生物的形成，其反应的时间都是相同，所以有重复性。因此反应完全不是重点。我的感觉是试剂不稳定。OPA的试剂极易氧化，也许你需要多加一点巯基乙醇试试。
