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2024-12-24 15:30:11

western blotting ，电泳时，用恒压好还是恒流好？

最近WB改了实验条件，主要是电泳方面的，原来是浓缩胶40V，分离胶70V，结果还行，只是电泳时间太长，足有5h，为了缩短电泳时间，我改为恒流，浓缩胶20mA，分离胶35mA，结果没有出任何条带，考虑到是否是电流太大，改浓缩胶为15mA，分离胶20mA，结果还是没有出来。请大家帮我分析一下原因，还有就是哪位用恒流跑过电泳，顺便指导一下（转膜应该没问题，100V，1h)

蛋白质组学

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5个回答

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一般浓缩胶70v,分离胶120v,15-75KD之间的蛋白都可以用100v，1.5h转膜，转过很多蛋白，这个条件都没有问题

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2024-12-24 15:46:10

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电泳恒流可以考虑浓缩胶40ma，分离胶55ma，转膜恒流300ma0.5h.

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2024-12-24 15:48:43

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恒流条件：浓缩胶每块10mA，分离胶每块15-20mA。这是我们用的条件，跑的还蛮好的

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2024-12-24 15:51:05

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一般电泳恒压效果好些，电流太大，容易引起胶在电泳过程中发热，使胶变形，影响电泳效果。

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2024-12-24 15:52:35

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我们的条件是浓缩胶60V 分离胶120V 30KD-180KD的蛋白都在用还不错

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2024-12-24 15:53:06

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