如何检测蛋白糖基化？

哺乳动物细胞培养上清中一个外源表达的分泌蛋白，western检测分子量比预测的大，信息学分析有糖基化位点，现在想检测是否存在糖基化，是在培养基中加入糖基转移酶抑制剂（有这种商品吗？）还是把培养基上清用去糖基化酶处理？谢谢！

蛋白质组学

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可以用质谱检测。

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2024-11-13 23:44:39

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糖基化有专门的糖基化抗体的，不需要在培养基中加入糖基转移酶抑制剂以及培养基上清用去糖基化酶处理。糖基化分为O-糖基化以及N-糖基化，糖基磷脂酰肌醇锚（（GPIGPI－－ANCHORANCHOR））糖基化。我们实验室有做N-糖基化的，用的是LCA来检测。以下链接一张图片关于研究蛋白质糖基化的常用方法。

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2024-11-13 23:47:15

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如果可以确定糖基化为N-linked, 可以用PNGaseF释放糖链，然后用SDS-PAGE 或者Westernblot鉴定目标蛋白分子量变化即可。单纯的鉴定是否为糖蛋白，方法就很多了，经费足可以打质谱，便宜的可以用化学的方法，比如PAS染色。

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2024-11-13 23:49:13

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提问时间：	2024-11-13
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