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2024-11-18 00:21:23
WESTERN BLOT能比较两个目的蛋白的相对量多少吗？分别用WB做出A蛋白、B蛋白、β-actin的条带。 能否利用各自条带与β-actin的灰度值比值 再相比较即（A蛋白灰度值/ β-actin的灰度值 ）÷（B蛋白灰度值/ β-actin的灰度值 ）从而说明实验组中A/B蛋白哪个蛋白相对含量更高？从WB上感觉上样量相同时条带AB深浅明显不同，但两个蛋白分子量接近，不能在同一个样品上比较，或者用RT-PCR可以比较基因水平么 △CT A=CT(A基因)- CT（内参基因） △CT B=CT(B基因)- CT（内参基因），△△CT=△CTA-△CTB |
3个回答
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灰度值或PCR或qPCR的相对值，仅仅用来比较同一种蛋白或RNA的相对表达量，比较不同基因之间的，不可靠 |
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可靠的方法之一，就是针对不同蛋白，分别用纯化的蛋白做标准曲线，然后检测计算样本中的对应蛋白的量。ELISA差不多就是这么定量的，灵敏度也高，此定量方法也被广为接受。主要针对血清中的一些因子，大部分蛋白并没有ELISA试剂盒检测，麻烦且费钱。或者用已知拷贝数的模板做qPCR标准曲线，分别定量之后再比较。做过ELISA的应该知道，不同因子的标准曲线并是不重叠的；同理灰度值或qPCR的值用来比较不同基因之间的表达量，靠不住。 |
