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2024-11-14 01:13:11

肝脏蛋白用BCA法定量非常高，但跑western 连内参（β-actin）都很淡？

肝脏蛋白用BCA法定量非常高，但跑western 连内参（β-actin）都很淡，不知道问题出在哪一个方面。我用小鼠的肝脏提取蛋白，组织先放在液氮里，然后放在-80度，之后要提取的时候，用机械法匀浆（用的是加入了磷酸酶、蛋白酶抑制剂以及PMSF的RIPA裂解液），匀浆后细胞裂解叫彻底。离心后显示沉淀很少。然后BCA法测定蛋白的浓度是非常高的，但是跑western的时候连内参β-actin都很淡，我不知道该怎么办了。大家有没有过类似的经历，然后如何解决这个问题的？谢谢帮助！

蛋白质组学

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排除流程错误的话，推测测的蛋白浓度不正确或者一抗二抗有问题。

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2024-11-14 01:21:05

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应该也与组织的新鲜程度相关

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2024-11-14 01:24:54

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你就没发现上样孔里有大量沉淀么？第N次重复：浓度稀释到10ug／ul以下再变性

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2024-11-14 01:29:11

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肝脏直接裂解去做WB,做出的WB条带很丑，不容易做出条带，主要原因是肝组织脂质含量太高，离心也没法去除，导致条带有拖尾或没条带，最好的方法是麻醉小鼠，肝门静脉用四型胶原酶灌流，分离肝细胞，做的WB就跟普通细胞一样整齐，清晰了

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2024-11-14 01:30:45

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