我们用的再生液好象主要成分是Tris 18.15g + SDS 3.03g + 巯基乙醇 配成500ml，使用时候在50度下温育30分钟，效果非常好。

你杂交那步的时候怎么就不行了？另外what is 膜再生液？是让膜上蛋白恢复活性的？恢复抗原性的？还是洗掉抗体用的？我估计是最后一种吧，如果你没有发出条带来，说明没有抗体结合，如果不是膜已经干了，就不用什么再生，直接重做没有关系。

我们用的再生液好像主要成分是Tris 18.15g + SDS 3.03g + 巯基乙醇 配成500ml，

使用时候在50度下温育30分钟，效果非常好。我是膜再生后染actin ，条带非常清晰，原来的抗体都洗掉了。有张膜再生了两次，都还不错。

等我看看，挺好用的。蛋白还在，但肯定是少了一些，但用来染actin应该问题不大。

一抗应该是掉了，蛋白可能也少了一些。

实验室是直接买的膜再生液，30min洗膜，然后重新杂交

用30%双氧水也可以呢，在蛋白面加个2ml左右，37°10Min，处理一次绝对没问题，但具体能重复这样操几次就不清楚了