我的免疫组化实验为什么会这样？有几条管道还呈绿色是否就是染出来的信号？

可以帮我分析下我的免疫组化实验为什么会这样吗？
我染的是淋巴管内皮标记Lyve-1（公司是eBioscience，一抗稀释度是1:200），二抗是488
488通道下，背景很高，有几条管道不知道是否是真实的Lyve-1信号。
但是549通道下，有几条管道还是呈现绿色，其他就是橘色，这是为什么？那几条仍然是绿色的是否是染出来的信号？
在594红色通道下，就没有那几个绿色管道存在了。
求高手解答，并指点如何把这个染色做得更好！谢谢！