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2025-01-17 16:23:28
WB内参为什么要选Tubulin?图中内参为什么选Tubulin？还有为什么对照组有2个？实验组也是两两重复（1和2）？还有右边的图为什么又没有两两重复比较了？ b, HeLa cells were transfected with different Atxn3，siRNAs or scrambled siRNA as a control. Ataxin 3 knockdown (KD)，efficiency is presented as well as basal LC3-II levels. LC3-II levels in，ataxin-3-depleted HeLa cells were normalized to control cells; n= 4，independent experiments. One-way ANOVA with post hoc Tukey’s test.
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3个回答
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个人愚见：不管你选什么内参，原则就是要尽量避开目的蛋白分子量相近的，选离得远的就不容易混在一起，这个目的蛋白ataxin3分子量在55以下，所以选tubulin好一些，因为预染蛋白的marker在55有条线，切膜时好区分。还有那个可能也不是两两比较，只是做了副孔，为了做柱状图时统计平均值。 |
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应该是你的内参和目的蛋白分子量差开一点比较好，可以剪开同时孵二抗，不过靠的比较近也没关系，可以先孵其中一个蛋白，显影后洗掉二抗再重新孵另外一个。一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。因此你要知道你检测的蛋白的分子量来选择合适的内参！ |
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①Tubulin即微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中Alpha Tubulin和Beta Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种Tubulin。Alpha tubulin和Beta tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参，Beta tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western Bloting时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察的微管结构。 ②两两重复个人理解应该是因为做了复孔，右图没有两两重复应该是统计的时候取了平均值 |