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2024-12-13 22:14:36

SDS-PAGE胶凝的太快，怎么办？

请教各位：我制胶的时候胶凝的太快，分离胶15分钟，浓缩胶2分钟左右.梳子都来不及插。15ml体系水 5.9，ML，ACR储存液 5，1.5Mtris 3.8，10％SDS 0.15,10%AP 0.15,TEMED 0.006，不知道是哪里出了问题。

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有段时间做AFLP，灌着灌着胶就凝了让我苦恼异常。。。

几点小建议吧：

1、适当降低AP的浓度。

2、现在温度越来越高了，胶凝得也快。

所以想办法降低一下室内温度或者胶的温度吧。

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2024-12-13 22:45:54

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在SDS-PAGE胶中AP是交连剂，TEMED是促凝剂，胶凝的太快,可以适当减少二者的用量，尤其是TEMED，至于适合的量是多少,需要你根据实验室条件进行摸索，DOOD LUCK!!!

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2024-12-13 23:01:01

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我以前在实验中遇到过这样的问题。凝胶的速度比你的还快，还没有来得及灌浇就凝了。后来发现，我的Tris缓冲液的PH值太高了，调整ph值以后就好了，如果你的问题还没解决的话，可以检查一下你的TrisPH值。这是个人经验，不知道是什么原因。

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2024-12-13 23:19:34

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建议你可以试着四度的条件下配胶试试...这样凝的会慢一点...稳定越高...凝的也越快...另外...促凝剂一定要最后放...一边放一边晃动...

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2024-12-14 17:43:18

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tris的pH请严格控制在8.8，不然可能出现的问题还不止胶凝聚太快，还可能导致交联度的不足。曾经遇到过一次，12%的胶连30kd的蛋白都无法分离出来，全部和loading buffer一起，分离不出来。

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2024-12-14 20:42:34

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胶凝的太快肯定不是好事!

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2024-12-14 20:49:24

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检查一下试剂有问题没有可以重配

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2024-12-14 23:08:28

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建议重配试剂，注意室内温度。我之前胶凝的太快是室温太高，三十七八度

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2024-12-15 03:08:08

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