很简单的问题，原因也很简单，做胶的时候不注意细节。

这种情况一般出现在拔底面spacer（大板胶通常有底部的封条）和样孔梳子的时候。原因有四种可能：

1. 1. 梳子过紧。梳子或底边spacer的宽度和两边spacer的宽度有极细微的差别（质量不合格或不配套），使得勉强用力拔梳子的过程中，造成玻板的错动。通常除梳孔漏样外，玻板底部往上会出现局部的气泡。

2. 2. 制胶时间过长或者制好后长时间不用却未采取保湿的措施。实际上这两者仍然造成问题1的麻烦，拔梳子时连带错动玻板。

3. 3. 进样的时候，加样枪头深入加样孔过深从而挤开玻板，造成微小错动。采用拉长的进样枪头，同时仍要注意不能插入过深。

4. 4. 玻板质量勉强合格。国产玻板不能做到非常光滑，使得稍微用力玻板就会松脱，产生错动。与胶体是否混匀无关，与水质无关（一定要用DDW，这是毫无疑问，不必经常提及的最基本的注意事项），与玻板是否洗净或磨损无关（与梳子是否磨损有点关，因为塑料制品磨损后不一定变薄，经常会边缘起皱增粗；同样使得本来一致的间距，由于梳子增粗，拔出阻力增大，极易造成微小错动）就本图而言，实验者最主要的弊病在于加样枪头过分深入，原因是中间孔道漏样，即非常可能就是加第6道时过分用力。若漏样出现在两侧，则主要问题在于拔梳子时的错动。不可能是加样器刺穿底部（假设加样器尖端比spacer间距小），如果是刺穿不会出现在堆积胶和分离胶分界位置一条线的漏样，而只会是一个点的汇集（刺穿点）；因此如果是刺穿，更核心的问题是刺穿的同时枪头将玻板挤开，造成微小错动。因此，如果你总是出现类似问题，请注意你每个实验细节。不要让胶干掉，凝固后尽量立即使用；即使不立即使用，请先拔去梳子和底部spacer，然后注意保湿。拔梳子请在液体中操作。加样时用拉长且更细的进样枪头；没有条件，也不要拼命拿枪头往下挤。

因为你的胶板没做好，当然跑任何人的样品都会漏样。“效果还可以”，真的不知道你是怎么判断的，如果样品漏掉，基本该lane就作废了，一组实验如果是一个重要的ctrl或者positive group，一次结果就报废了。其实，关于玻板要洗干净之类，我懒得去提；这是最基本的常识，应该不用特别提醒才对。如果这点做不到，想做好实验或者说让实验很稳定，我想是很难的，玻板未洗净的坏处很多。尽管玻璃看似平滑，但是一些细微的凹陷处会凝结肉眼无法分辨的胶颗粒（摸上去疙疙瘩瘩），其坏处是，在该部位极易导致不均匀的胶块，样品经过该处或电泳散热不好，条带变形。如果是RNA的超薄胶，胶板的颗粒会导致局部巨大气泡，非常难于清除；蛋白胶也会导致一些小气泡的产生。懒得提不等于这点不重要，不干净＝不光滑，玻板不光滑直接影响粘粘的牢固程度。顺便说一句：因为玻板干净很重要，我从来不会拿公用的。我会自己keep一套自己专用，每次自己用洗洁精（非洗衣粉，洗衣粉洗不干净玻板）清洗，放在自己的bench上晾干——这些都是常识。实际上，上一次回答中我就已经告诉过你这个问题的解决方案，你的核心目的是尽量减小板间错动。那么灌胶的时候，先插好梳子再夹到胶槽上——再灌胶。如果你要问梳子插上去了怎么灌胶？先插一半总可以吧。当然压胶液体的清除相对麻烦，如果是异丙醇似乎必须清除干净，那么你可以使用台式真空泵；如果没有多用几张吸水纸。然后灌堆积胶，堆积胶灌好后，再把梳子全压进去。然后电泳缓冲液中拔梳子（比水更好，有SDS润滑）。至于你觉得那个正确的答案：他唯一可行的地方就是干净的玻板；磨损小的玻板＝＝光滑，干净＝＝光滑，玻璃介质表面光滑的时候黏附最紧——中学的物理常识。PS：RIPA用过<3次，均未出现你说的现象。不再纠缠这个问题了，哎！

其实大家说的都有道理，但该问题的发生根本还是在制胶过程。如果你观察细致的话，就可以发现，某个泳道漏下来，也只是漏到了积层胶与分离胶交界的部位，而且你若是低电压压的话，到了分离胶情况就有所好转。所以根本原因还是用来压平分离胶的液体没有清除干净。解决办法：分离胶制好后，不管是用水压（我就用水）还是别的什么，再灌积层胶前，是很难清除表面那一层的。所以，只要在灌积层胶之前，先取少量胶液灌进胶板，迅速轻轻左右晃几下，让液体充分沾上分离胶上层，再把这些胶液去掉，然后再正式灌满积层胶，插进梳齿。问题就解决了。我说的很复杂，其实很简单，就是先用积层胶的液体润一下就行了。我的经验是积层胶的AP和TEMED先不加，去水，再加AP和TEMED，混匀，第一次灌少量，晃几下，去除，再正式灌满。整个动作要快要轻柔。试试吧，肯定可以。

看图后有以下意见：

1 第6道加样时可能是加样器尖部刺穿了胶底部，所以漏了。

2 蛋白样品没有和上样缓冲液充分混合。

3 制胶时，要充分混匀，使得胶的质地均匀。

补充一下玻璃板检查下有没有问题，还有就是配胶我们实验室都是用的超纯水