2024-11-05 11:28:06

SDS胶上的条带可不可以割下来直接去测序?

各位,我最近在努力寻找一个未知蛋白,提取之后做SDS-PAGE只有一次成功,以后不知道是蛋白降解问题还是操作问题,再也重复不出来了。所幸成功的那次胶还保存完好。现在有三个问题请教各位高手:

1. SDS胶上的条带可不可以割下来直接去测序?

2. 最大的问题是那条带特别浅(考马斯亮蓝染色,肉眼可以看见),夹在另外两条较深条件之间。那么,蛋白测序仪能识别那么小的浓度吗?(因为只有这么一次好像成功了,测不出来样品就再也没有了:~))。

3. 我在网上搜索,怎么也找不到合适的蛋白测序公司,像英骏、宝生物、诺维信等各大生物公司我都打电话问过了,人家都只测DNA,不测蛋白,郁闷中:!(后来听说北大和军科院可以测,那我的问题是到那里是有专门的人给测还是自己测啊?(自己没有测过,万一测不出来呢:~))



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5个回答

我们送样出去要么是纯品要么是电泳后转到PVDF膜上的,以前咨询的时候说电泳胶是没法测序的,必需先转到膜上。



2024-11-05 11:38:57

问蛋白的N端测序和C端测序,edman化学测序 或 二级质谱,好想是提供蛋白就可以了 膜用他们的测序膜 WB用的不可以




2024-11-05 13:28:59

不需要这么麻烦的,只要你蛋白够纯的话就可以了,denovo测序,而且测的时候你只要给凝胶就可以了,剩下的公司都会搞定的,




2024-11-05 13:47:40

可以去做质谱,质谱所需的量很少,大约1-10pmol,你只要把胶带过去就可以了。很多地方可以测得,中科院生物物理所,浙江大学等




2024-11-05 14:07:15

SDS蛋白胶条可以使用质谱测序法进行测序,可以做胶内酶切,再使用质谱进行测序。如果事用考马斯染料染后,肉眼可以看到的话,一般来说质谱鉴定是没有问题的。多数SDS-PAGE胶分离的蛋白条带中都含有多个蛋白,鉴定这些复杂蛋白可以通过色谱质谱串联鉴定法,先通过色谱将复杂蛋白分组分,再通过质谱对一个个组分进行分析。



2024-11-05 14:10:12

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