这是我用的肿瘤干细胞培养基配方，供大家参考，应该会对你的成球实验有所帮助：cancer stem cell media (serum free)，500ml DMEM/F12+Glutamax include：

一、1%P/S (双抗），

二、1% Sodium pyruvate（丙酮酸钠）（加5g)，

三、1% MEM Non-Essential Amino Acids Solution 10 mM (100X) (invitrogen)(加5ml)，

四、1% Insulin-Transferrin-Selenium-X Supplement（ITS) (100X)(invitrogen)(加5ml)，

五、1uM dexamethasone(地塞米松）

六、200uM L-ascorbic acid 2-phosphate (sigma aldrich) (加28.954mg)，

七、10mM Nicotinamide (尼克酰胺） (sigma aldrich) （加 610.6mg)，

以上配好后可以在4度长期保存，每次用时的配方如下：

add fresh per 50ml media( cancer stem cell media)，每50ml 上述配好的培养基，加入：

1. 1.20ng/ml EGF(加10ul EGF(100ug/ml))；

2. 2. 10ng/ml FGF-2( 加5ul FGF-2(100ug/ml))每三天换液。

   
   

首先不是每个细胞系都能成球的，一般来说恶性程度很高的肿瘤细胞才有可能。1、培养皿可以选择6，12，24孔板，也可以选择100 mm培养皿。2、密度需要自己摸索。低密度常用于元代肿瘤干细胞的提取，筛选可以非粘附生长的细胞。高密度用于细胞球的扩增，一般来说5000/ml以上。3、一周加两次生长因子没有问题的。细胞球生长很缓慢，培养基中的FGF和EGF至少能够支持2周以上。不推荐直接添加的，确实会影响细胞质量。细胞球传代需要用弱的消化酶，我使用的是TrypLE Express。据说Accutase和Dispase也可以。

有的恶性程度高的细胞系是很容易成球的，但有的细胞系很困难。我用的方法是可以定期加入含生长因子的培养基，离心换液。有的细胞球很不容易吹散，有的很容易，要摸索。如果细胞球相对比较纯之后，就算打散了还是非常容易再形成的。