2024-11-14 08:02:47
芯片用化学发光进行检测效果如何?第一次作基因芯片,不知是交给公司作好,还是自己作好?如果交给公司做,结果在国外发表文章是否承认?芯片用化学发光进行检测效果如何?我具体是想作细胞周期和凋亡相关基因,比较看好clontech公司的apoptosis microarray, 以及美国superarray公司的GEArray S Series Human Apoptosis & Cell Cycle Gene Array 人细胞凋亡和细胞周期基因芯片 ,不知道效果如何?此外,膜比较贵,有的只能使用一次,挺担心一次实验,由于缺乏经验,操作不慎,导致前功尽弃。非常感谢! |
我水平可能跟你差不多,这么久没人应,就我的看法说两句。问这么外行的问题说明你及你周围的人都没有作过芯片。芯片的试验至少需要以下几步:(一) 总RNA制备;(二) mRNA的分离与纯化;(三) 探针标记与纯化;(四) 杂交及洗涤;(五)图像处理与数据分析————其中第一至四步跟普通的试验差不多。 “Quality is everything when it comes to microarray science.”因为芯片价格的问题,我认为“挺担心一次实验,由于缺乏经验,操作不慎,导致前功尽弃。”的考虑是非常有道理的。“图像处理与数据分析”又包含4个部分:扫描仪扫描产生图像,图像文件到数据文件(也就是intensity的具体数值)的转换,数据的标准化过程,数据的进一步分析--就跟普通的试验差太多了:一、首先扫描仪很贵的,一般试验室不会特别去买。二、而且“数据的标准化过程”目前都没有完全公认的方法,即使发表在NATURE上也不一定经得起时间的检验。所以你要决定选哪几种就太难了。三、个人认为你也只有把注意力放在“数据的进一步分析上了。所以结论是只有交给公司做了。————这是一个菜鸟的看法,仅供参考,你一定要征得老手的意见后再作决定。 |
基因型还是表达谱?现在芯片的制作技术都不是很过关,光一个基因芯片的结果 好像不可能发表在较高档的杂志上的 |
如果是做表达谱的芯片,看你的经费而定。如果充足的话,可以用affymatrix的芯片,通量高,是玻璃片。但是如果你想特定选看一些细胞凋亡的基因,可以用clontech和superarray的都可以。一般来所说,点在膜上的芯片,可以重复用3次,杂交后可以洗脱。洗脱后的杂交效果,要看你的技术操作。如果洗的不好,可能会影响第二次的杂交信号,最终把几次的结果平均下来的误差会增加。表达谱芯片只是起到筛选的作用,高通量的结果必然会存在假阴性和假阳性的问题。即使是affy的也是一样的。我们做出来的都达不到公司里承诺的有效率。交给公司做,也是一样会存在这个问题的。其中的验证要靠后续的实验来确证。所以,要看你的经费情况,交给公司做,省得自己烦。现在文章发的都很多,用国内的芯片都有发国外文章的。你可以自己搜索一下就知道了。现在多数用荧光杂交的。以前多用P32杂交。clontech膜的芯片,我用过就是P32杂交的。当然同位素的敏感性最高。不过随着技术的提高,Cy的标记效果也是不错的。 |
提问时间: | 2024-11-14 |
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