2024-12-30 08:03:27

加药后提癌细胞蛋白做wb发现蛋白含量很低,无法上样,怎么办?

做药物处理癌细胞,分别做6孔板及6cm皿中接种并处理细胞,harvest后根据镜下细胞密度决定RIPA量(6cm 和6孔板里每孔的量),置于冰上裂解30min后刮下转移ep离心取上清,建立bsa标准曲线。标准曲线的建立:bsa2mg/ml。按照浓度0,0.5,1,2,4,6,8,10倍稀释后得到的浓度0,0.1,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6,2mg/ml 浓度梯度得到相应OD建立标准曲线,结果显示求的样本浓度特别低,按照30ug上样根本无法满足,求高手指出步骤中可能存在的失误。 


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2个回答

不一定是你操作问题。你可以先试试不加药六孔板肿瘤细胞收的蛋白量。如果这个正常,再按照标准步骤重复一次试试。如不行就要扩大培养规模,用更大的皿养。


2024-12-30 09:01:50

RIPA提蛋白上清只是可溶性蛋白,沉淀里还有不可溶蛋白,只用上清的话就丢失了一部分蛋白,现在国外有一种离心管柱式总蛋白提取地方法,可以解决你这种样本量小,蛋白浓度低的问题

2024-12-30 09:14:33

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