如果检测的目的蛋白与IgG包括轻重链的分子量差别悬殊的话，可以忽视一抗来源的种属亚型等影响，因为在目的蛋白分子量位置如果检测出来单一条带，基本上可以判定是目的蛋白；如果检测的目的蛋白与IgG包括轻重链的分子量接近或者等同，就要考虑假阳性的问题，这时候比较可行经济解决的手段可以选择特别的二抗，其只能识别自然条件下的IgG片段（变性后的IgG片段不能结合），还可以选择将一抗共价偶联在agarose 的上面（Pierce有相关kit），这样洗脱的时候可以避免一抗的污染

如果做IP时用A抗体，检测时还是用A抗体，再孵育2抗的时候二抗是不是对A抗体识别了两次？既有IP时A煮断的重轻链，又有WB时候的A抗体。It all dependent on th 2nd Ab. If it is against whole antibody, it is true.如果是异源抗体，即IP的时候用鼠的，WB检测时候用兔的，是不是只识别一次？那按理论讲是不是应该连重链轻链都没有？还有，抗体的IgG也是分压型的，比如IgG1、2、2a、2b等等，不同的亚型在检测的时候会有什么影响？In most case, it can be ignor.最后，IP时用A抗体，假如A抗体是鼠IgG2b，如果对照IgG用鼠的IgG1,或者2a，是不是就完全没有意义了？？？It is better to use same subtype for IP and control. But if the control subtype is not commercial available, you can use similar subtype.