Western blot 内参跑不齐怎么调整?师姐用常规的方法提蛋白后,根据等质量,测浓度算得每个细胞的体积。然后加样跑胶的时候,确保等体积用buffer补齐。然后跑出来的内参不齐。连她自己也不知道是根据什么来调整跑齐内参的,有知道的吗?
分光光度计会测出一个值,然后我把这个值作为相对浓度值C,然后调节每个sample的体积V,使得每个sample的V*C的值是一样的,这样的话就使得所有sample的相对内参是齐了(我说相对的意思是我不清楚他们的既定质量与浓度是多少,但我只负责配平内参的loading)
BCA蛋白定量,调整每个孔道的蛋白总量
跟RT-PCR一样,上样是保证蛋白的总量一样,不能单纯确定体积