RT-PCR做不出目的条带，是否是逆转录酶有问题？

我做了一个月的RT-pcr，内参总能出来，可目的条带要么没有，要么弥散，退火温度，mg2+都摸过了。今天发现逆转录酶过期了，请问是不是这个原因，但为什么内参能出来呢？

发育生物学细胞生物学遗传学

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有内参出来应该说逆转录酶问题不大,问题可能是在引物上,有在PUBMED上blast过吗?特异性如何?还有是引物的工作浓度是否正确?我个人觉得内参可以出来就应该找引物的问题

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2024-12-30 05:26:08

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RT-PCR常用引物为oliga dT、随机引物和特异性引物，楼主用的应该是前两种，但是因为反转录酶的活性问题，有时候得到的cDNA并不是全长。

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2024-12-30 05:27:08

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